Plasmide Double Nickase (h) SLC26A3: sc-403891-NIC

Le gène humain **SLC26A3** code un échangeur d’anions membranaire (DRA) qui assure un échange électroneutre chlorure/bicarbonate et contribue à l’absorption des électrolytes par l’épithélium intestinal ainsi qu’au maintien de l’homéostasie du pH luminal. En régulant les flux ioniques transépithéliaux, SLC26A3 intervient dans des processus qui gouvernent l’équilibre hydrique, la stabilité de la couche de mucus et la fonction de barrière épithéliale du tractus gastro-intestinal. Une activité altérée de SLC26A3 est associée à la diarrhée chlorée congénitale et a été impliquée dans des mécanismes plus larges de dérégulation épithéliale, notamment dans des contextes inflammatoires et néoplasiques du côlon. En tant que transporteur modulant les micro-environnements ioniques locaux, SLC26A3 est pertinent pour l’étude de la différenciation des entérocytes, des réseaux de transporteurs et de la signalisation couplée aux ions.

SLC26A3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus SLC26A3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de SLC26A3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de SLC26A3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de SLC26A3.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.