Plásmido CRISPR de Activación (m) SLC12A8: sc-431364-ACT

Slc12a8 codifica SLC12A8, un miembro de la familia de transportadores acoplados a cationes solute carrier 12 (SLC12) que regula los gradientes iónicos de membrana y contribuye a la homeostasis osmótica epitelial y celular. Mediante la modulación del flujo acoplado de Na⁺/K⁺/Cl⁻ y de las fuerzas impulsoras electroquímicas relacionadas, SLC12A8 puede influir en el control del volumen celular, los procesos de transporte transepitelial y la señalización downstream vinculada a vías metabólicas y de respuesta al estrés. La actividad alterada de los transportadores SLC12 se asocia con frecuencia a desequilibrios electrolíticos y a cambios en la fisiología tisular, lo que convierte a Slc12a8 en un objetivo útil para investigar mecanismos dependientes de transportadores en contextos normales y relevantes para la enfermedad. En modelos murinos, la regulación de Slc12a8 puede aprovecharse para estudiar cómo el transporte iónico se relaciona con la función de barrera, la inflamación y la adaptación metabólica.

SLC12A8 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Slc12a8 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SLC12A8 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Slc12a8 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Slc12a8, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SLC12A8. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Slc12a8 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SLC12A8 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SLC12A8 en células tumorales con expresión de Slc12a8 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.