Particules Lentivirales d'Activation (m2) Skint8: sc-437039-LAC-2

Skint8 chez la souris (selection and upkeep of intraepithelial T cells protein 8) est un membre de la famille butyrophilin-like/Skint, impliquée dans la régulation immunitaire des épithéliums, avec des rôles présumés dans l’orientation de la sélection des lymphocytes T et le maintien de ces cellules au sein des tissus barrières tels que la peau. Les protéines Skint sont généralement associées aux interactions cellule–cellule et à des programmes de signalisation dépendants des récepteurs antigéniques, qui influencent la différenciation des lymphocytes dans le thymus et en périphérie, contribuant ainsi à l’homéostasie immunitaire des tissus résidents. Une dérégulation des voies de la famille Skint est pertinente pour l’étude de l’inflammation cutanée, de la défense de l’hôte au niveau des surfaces épithéliales et des mécanismes de surveillance immunitaire. Skint8 constitue donc une cible utile pour l’édition génomique afin d’explorer le dialogue épithélio-immunitaire, de cartographier les signaux de développement des lymphocytes T résidents des tissus et de modéliser, dans des systèmes murins, la manière dont les réseaux immunorégulateurs associés aux barrières influencent les phénotypes inflammatoires.

Les particules d'activation lentivirales Skint8 (m2) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Skint8 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Skint8 (m2) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Skint8, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Skint8. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Skint8 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.