Particules Lentivirales d'Activation (h) Six2: sc-402975-LAC

SIX2 code pour Six2, un facteur de transcription à homéoboîte qui régule le maintien des cellules progénitrices et la spécification des lignages au cours du développement humain du rein et de la région craniofaciale. Six2 intervient dans des réseaux transcriptionnels contrôlant l’auto-renouvellement et la différenciation des progéniteurs néphroniques, en s’intégrant à des voies telles que la signalisation WNT/β-caténine, FGF et BMP afin d’équilibrer les programmes de croissance et de maturation. Une expression dérégulée de SIX2 a été associée à des troubles du développement affectant la morphogenèse rénale et l’organisation craniofaciale, et une activité de SIX2 altérée est également étudiée dans des contextes de plasticité épithélio-mésenchymateuse et de biologie tumorale. En tant que régulateur nucléaire se liant à l’ADN, Six2 constitue un nœud accessible pour disséquer les circuits de régulation génique qui gouvernent l’état de différenciation et l’identité tissulaire.

Les particules d'activation lentivirales Six2 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de SIX2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Six2 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription SIX2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Six2. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif SIX2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.