Plásmido Doble Nickase (m) SIRT5: sc-427028-NIC

Sirt5 de ratón codifica la sirtuina mitocondrial SIRT5, una desacilasa de lisina dependiente de NAD⁺ con destacadas actividades desuccinilasa, demalonilasa y deglutarilasa que ajustan la función de las enzimas mitocondriales. Al revertir modificaciones de acil-lisina no acetiladas, SIRT5 ayuda a regular el metabolismo central del carbono, la oxidación de ácidos grasos, el ciclo de la urea y el manejo de especies reactivas de oxígeno, contribuyendo así a la homeostasis mitocondrial durante el estrés nutricional y oxidativo. En la literatura, la actividad alterada de SIRT5 se ha vinculado con reprogramación metabólica, desequilibrio redox y fenotipos de disfunción mitocondrial que convergen con vías relevantes para la cardiometabolismo y la neurodegeneración. Estas características hacen de Sirt5 una diana útil para investigar el control posraduccional del flujo mitocondrial y la señalización adaptativa al estrés en células de mamífero.

SIRT5 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Sirt5 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Sirt5. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Sirt5. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Sirt5 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.