SIRT5 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-416994-ACT

ヒトSIRT5は、ミトコンドリアに局在するNAD+依存性サーチュインをコードしており、主にリジン脱スクシニル化、脱マロニル化、脱グルタリル化酵素として機能することで、代謝酵素のアシル化状態を再構築します。TCA回路、脂肪酸酸化、ケトン体代謝、尿素回路に属する標的を制御することにより、SIRT5は栄養状態の変化に応じたミトコンドリアのエネルギーホメオスタシスとレドックスバランスを統合的に調節します。SIRT5活性の変化は、ミトコンドリア機能障害、酸化ストレス応答、ならびに多様な疾患関連の細胞状態（がん生物学、心代謝疾患、神経変性に関連する表現型など）で観察される中間代謝の再配線と関連づけられています。これらの特徴により、SIRT5はミトコンドリア経路やストレス適応型代謝の翻訳後制御を研究するうえで有用な結節点となります。

SIRT5 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SIRT5の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SIRT5 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SIRT5 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSIRT5転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SIRT5の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSIRT5遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSIRT5依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSIRT5発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSIRT5経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。