Plasmide Double Nickase (r) SIRT3: sc-437315-NIC

SIRT3 code une désacétylase mitochondriale dépendante du NAD+ qui régule le métabolisme oxydatif et l’homéostasie des protéines mitochondriales en désacétylant des enzymes impliquées dans l’oxydation des acides gras, le cycle de l’acide citrique (cycle de Krebs) et la chaîne de transport d’électrons. En contrôlant l’équilibre rédox mitochondrial, SIRT3 module la détoxification des espèces réactives de l’oxygène et soutient les réponses adaptatives au stress énergétique et oxydatif. Une activité altérée de SIRT3 a été associée à une dysfonction mitochondriale et à une bioénergétique déréglée dans des contextes tels que les maladies métaboliques, le remodelage cardiaque induit par le stress, la neurodégénérescence et le métabolisme tumoral, ce qui en fait une cible courante d’études mécanistiques dans des modèles de rat. Ces voies relient SIRT3 au contrôle qualité mitochondrial, à la signalisation du stress et à des processus liés à l’apoptose, fréquemment explorés en recherche biomédicale.

SIRT3 Le plasmide double nickase (r) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus dans les lignées cellulaires rat. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de . Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de . En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de .

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.