SIRT1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400085-NIC

SIRT1は、代謝、ストレス適応、ゲノム維持を制御する転写プログラムを統合的に調節する、NAD⁺依存性のタンパク質脱アセチル化酵素をコードします。p53、FOXO因子、NF-κB、PGC-1αなどの基質を脱アセチル化することで、SIRT1はDNA損傷応答、ミトコンドリア新生、オートファジー、炎症シグナル伝達に関連する経路を調節します。SIRT1の活性は、NAD⁺の利用可能性を介して細胞のエネルギー状態と密接に結び付いており、AMPK–mTOR系やインスリン/IGFシグナルネットワークとのクロストークによっても制御されます。SIRT1シグナルの破綻は、加齢に伴う表現型の変化と関連することが示されており、代謝疾患、神経変性、腫瘍生物学などの文脈で研究されています。

SIRT1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における SIRT1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、SIRT1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、SIRT1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、SIRT1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。