SIM1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405931-ACT

ヒトSIM1（single-minded homolog 1）は、視床下部の発生および神経内分泌の恒常性に必要な、神経系の系譜決定と転写プログラムを制御するbHLH-PAS型転写因子をコードする。SIM1はARNTファミリーのパートナーとのヘテロ二量体化と、PASドメインを介したシグナル統合を通じて機能し、食欲調節、自律神経バランス、エネルギー消費に関与する遺伝子ネットワークを制御する。SIM1の用量変化や制御異常は視床下部機能障害や肥満関連表現型と関連しており、代謝経路の転写制御を研究するうえで有用な結節点となる。細胞・組織モデルにおいて、SIM1は発生過程の転写回路、エンハンサーのロジック、ならびに下流の神経ペプチドシグナル伝達を解明するための扱いやすい入口を提供する。

SIM1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SIM1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SIM1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SIM1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSIM1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SIM1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSIM1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSIM1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSIM1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSIM1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。