Plásmido CRISPR de Activación (h) SIK1: sc-401769-ACT

La quinasa inducible por sal 1 (SIK1) es una quinasa de serina/treonina de la familia de quinasas relacionadas con AMPK que transduce señales dependientes de cAMP/PKA para regular programas transcripcionales que controlan el metabolismo, la señalización circadiana y las respuestas al estrés. SIK1 modula la actividad de CREB/CRTC y contribuye al control, dependiente de la fosforilación, de coactivadores transcripcionales, conectando señales extracelulares con cambios en la expresión génica en múltiples tipos celulares. A través de estas vías, SIK1 influye en la homeostasis energética celular, la diferenciación y las respuestas adaptativas a estímulos ambientales. La desregulación de la señalización de SIK1 se ha asociado con alteraciones en la regulación metabólica y un control transcripcional aberrante en contextos relevantes para la enfermedad, lo que respalda su uso en estudios mecanísticos del acoplamiento entre señalización y transcripción.

SIK1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SIK1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SIK1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SIK1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SIK1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SIK1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SIK1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SIK1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SIK1 en células tumorales con expresión de SIK1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.