Plasmide CRISPR d'Activation (h) Sialyltransferase 7A: sc-406723-ACT

ST6GALNAC1 code la sialyltransférase humaine 7A, une glycosyltransférase résidente de l’appareil de Golgi qui catalyse la sialylation α2,6 des résidus GalNAc sur les O‑glycanes, contribuant ainsi à façonner les profils de glycosylation de type mucine à la surface cellulaire et dans les protéines sécrétées. En contrôlant l’affichage terminal de l’acide sialique, elle influence des processus dépendants des glycannes, notamment la stabilité des protéines, les interactions récepteur‑ligand et la signalisation médiée par les lectines au sein de la voie de sécrétion. Une activité modifiée de ST6GALNAC1 peut déplacer la composition des glycoépitopes sialylés et a été associée à des changements d’adhérence cellulaire et de reconnaissance immunitaire, ce qui la rend pertinente pour l’étude de la glycosylation associée aux tumeurs et des microenvironnements inflammatoires. Ce gène est donc fréquemment analysé dans des études au niveau des voies portant sur le remodelage de la glycosylation, la différenciation épithéliale et la communication cellule–matrice.

Sialyltransferase 7A Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ST6GALNAC1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Sialyltransferase 7A Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ST6GALNAC1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ST6GALNAC1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Sialyltransferase 7A. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ST6GALNAC1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Sialyltransferase 7A au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Sialyltransferase 7A dans les cellules tumorales présentant une expression de ST6GALNAC1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.