SHISA2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406895

概要

SHISA2（shisaファミリーのメンバー2）は、受容体の成熟および輸送（トラフィッキング）の制御に関与するとされる一回膜貫通型タンパク質をコードしており、細胞表面受容体の利用可能性を調節することでWntおよびFGFシグナルの出力を制御する役割が報告されています。経路の強度や空間的なシグナル入力に影響を与えることで、SHISA2は発生や組織リモデリングの過程における上皮間葉転換（EMT）プログラム、細胞接着ダイナミクス、ならびに系譜（運命）決定に影響し得ます。SHISA2の発現変化は複数のがんトランスクリプトームデータセットで観察されており、浸潤性や転移能の変化との関連も示されていることから、腫瘍性シグナル伝達の可塑性を機構的に研究するための結節点として有用であることが支持されています。SHISA2を標的とするin vitroモデルにより、受容体媒介シグナルの閾値、文脈依存的な経路間クロストーク、ならびに腫瘍進展生物学に関連する下流の転写状態を検討できます。

SHISA2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるSHISA2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、SHISA2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、SHISA2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、SHISA2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、SHISA2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、SHISA2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• SHISA2の機能に不可欠なSHISA2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、SHISA2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• SHISA2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびSHISA2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、SHISA2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  SHISA2 HDRプラスミド（h）および SHISA2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSHISA2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSHISA2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。