SHIP-2 Plasmide Double Nickase (m): sc-421138-NIC

Inppl1 codifica SHIP-2 (fosfatasi dell’inositolo 5 contenente dominio SH2, 2), una fosfatasi lipidica che converte PI(3,4,5)P3 in PI(3,4)P2 e modula così la segnalazione dei fosfoinositidi a valle delle tirosin-chinasi recettoriali e dei recettori immunitari. Regolando l’ampiezza della via PI3K–AKT e la segnalazione spaziale a livello della membrana plasmatica, SHIP-2 influenza la segnalazione insulinica, l’omeostasi del glucosio, l’adesione cellulare e la dinamica del citoscheletro. Nei tessuti murini, l’attività di SHIP-2 è stata collegata alla regolazione metabolica e alla segnalazione infiammatoria, e le alterazioni della funzione di INPPL1/SHIP-2 sono studiate in contesti che includono resistenza all’insulina, fenotipi associati all’obesità e riorganizzazione della segnalazione correlata al cancro. Questi ruoli rendono Inppl1 un nodo utile per analizzare il cross-talk tra segnalazione di fattori di crescita, endocitosi e rimodellamento dell’actina.

SHIP-2 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Inppl1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Inppl1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Inppl1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Inppl1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.