Plásmido Doble Nickase (m) SHIP-2: sc-421138-NIC

Inppl1 codifica SHIP-2 (fosfatasa de inositol 5 que contiene dominio SH2, 2), una fosfatasa lipídica que convierte PI(3,4,5)P3 en PI(3,4)P2 y, de este modo, ajusta la señalización de fosfoinosítidos aguas abajo de los receptores tirosina cinasa y de los receptores inmunitarios. Al modular la amplitud de la vía PI3K–AKT y la señalización espacial en la membrana plasmática, SHIP-2 influye en la señalización de la insulina, la homeostasis de la glucosa, la adhesión celular y la dinámica del citoesqueleto. En tejidos de ratón, la actividad de SHIP-2 se ha vinculado con la regulación metabólica y la señalización inflamatoria, y la función alterada de INPPL1/SHIP-2 se estudia en contextos que incluyen la resistencia a la insulina, fenotipos relacionados con la obesidad y la reprogramación de la señalización asociada al cáncer. Estos roles hacen de Inppl1 un nodo útil para diseccionar la comunicación cruzada entre la señalización por factores de crecimiento, la endocitosis y la remodelación de actina.

SHIP-2 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Inppl1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Inppl1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Inppl1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Inppl1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.