Plasmide CRISPR d'Activation (h) Shc: sc-400914-ACT

SHC1 code pour la protéine adaptatrice Shc, un transducteur central de signaux qui relie les récepteurs à activité tyrosine kinase et les récepteurs aux cytokines activés à des cascades en aval, notamment RAS–MAPK/ERK et PI3K–AKT. Grâce à ses domaines PTB et SH2, Shc coordonne l’assemblage, dépendant de la phosphorylation, de complexes de signalisation qui régulent la prolifération, la différenciation, la survie et les réponses au stress cellulaire. La signalisation dépendante de SHC1 s’interface également avec les voies de l’insuline/IGF et influence la signalisation mitochondriale ainsi que le stress oxydatif, contribuant à des modifications contextuelles de la croissance cellulaire et de l’apoptose. Une dérégulation de la signalisation SHC1/Shc a été associée à une activité anormale des voies des facteurs de croissance en biologie du cancer, ainsi qu’à une dynamique de signalisation altérée dans des modèles de recherche sur le métabolisme et la neurodégénérescence.

Shc Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SHC1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Shc Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SHC1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SHC1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Shc. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SHC1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Shc au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Shc dans les cellules tumorales présentant une expression de SHC1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.