Shank2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-431686

概要

Shank2は、SH3ドメインおよび複数のアンキリンリピートドメインをもつタンパク質2（SHANK2）をコードしており、SHANK2は、イオンチャネル型受容体や接着複合体を下流のシグナル伝達系およびアクチン細胞骨格へと結び付けることで、グルタミン酸作動性シナプスを組織化するシナプス後肥厚（PSD）の足場タンパク質である。ニューロンにおいてSHANK2は、PSD-95ファミリータンパク質、Homer–mGluR複合体、ならびにアクチン制御経路との相互作用を介して、シナプス成熟、スパイン形態形成、活動依存的リモデリングの協調に寄与する。Shank2依存的な足場機能の破綻は、興奮性シナプス伝達やシナプス恒常性を変化させ得るため、神経回路の接続性と可塑性プログラムにおける重要な結節点として頻繁に研究されている。遺伝学的および機能的研究により、SHANK2の異常が神経発達性の表現型と関連することが示されており、in vivoおよび培養マウスニューロンにおけるシナプス機能不全メカニズムのモデル化に有用であることが支持されている。

Shank2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるShank2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Shank2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Shank2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Shank2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Shank2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Shank2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Shank2の機能に不可欠なShank2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Shank2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Shank2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびShank2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Shank2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Shank2 HDRプラスミド（m）および Shank2 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはShank2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のShank2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。