SH2D1A Double Nickase Plasmid (h): sc-404747-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das SH2D1A Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- SH2D1A Double-Nickase-Plasmid (h) und SH2D1A Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf SH2D1A abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: SH2D1A: sc-398118
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
SH2D1A Double Nickase Plasmid (h) | sc-404747-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SH2D1A Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404747-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SH2D1A kodiert ein Adapterprotein mit SH2-Domäne (SAP), das SLAM-Familienrezeptoren in T-Zellen und NK-Zellen mit nachgeschalteten Signalwegen koppelt und so zytotoxische Funktionen, die Zytokinproduktion und die Zusammenarbeit von Lymphozyten prägt. Durch die Modulation von Interaktionen mit Kinasen und inhibitorischen Phosphatasen beeinflusst SH2D1A die Bildung der immunologischen Synapse sowie Signalierungsschwellen, die antivirale und humorale Immunantworten steuern. Störungen von SH2D1A beeinträchtigen SLAM-vermittelte Signalwege, die die Aktivität zytotoxischer Lymphozyten und die Hilfe für B-Zellen kontrollieren, und führen zu einer Fehlregulation des Immunsystems. Loss-of-function-Varianten sind mit der X‑chromosomal vererbten lymphoproliferativen Erkrankung Typ 1 assoziiert, mit einer Anfälligkeit für schwere EBV-assoziierte Immunpathologie und weiterreichenden Defekten der Immunhomöostase.
SH2D1A Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SH2D1A-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SH2D1A abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SH2D1A-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SH2D1A-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.