SH2D1A CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422910

概要

Sh2d1a は、SH2 ドメインをもつアダプター分子 SH2D1A（SAP）をコードしており、主に T 細胞および NK 細胞で発現し、SLAM ファミリー受容体を下流シグナル伝達へと連結します。SH2D1A は、受容体近傍の複合体を協調的に形成し、キナーゼやホスファターゼを調節することで、免疫シナプス形成、細胞傷害性エフェクター機能、ならびに抗ウイルス応答や体液性免疫応答における T 細胞ヘルプを制御します。SH2D1A 依存的シグナル伝達の破綻は、リンパ球の活性化と免疫恒常性を乱し、免疫調節異常、ウイルス感染感受性、リンパ増殖性表現型の研究において重要です。マウスの Sh2d1a モデルは、胚中心生物学における SLAM–SAP 軸の寄与や、感染細胞・形質転換細胞の NK/T 細胞による制御機構を解析するために広く用いられています。

SH2D1A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるSh2d1a遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Sh2d1a内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Sh2d1aのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、SH2D1Aタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、SH2D1Aシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Sh2d1a欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• SH2D1Aの機能に不可欠なSh2d1aエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Sh2d1aゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• SH2D1A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびSH2D1A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Sh2d1a遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  SH2D1A HDRプラスミド（m）および SH2D1A HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSh2d1aホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSh2d1a標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。