SH2-B CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422909

概要

マウスSh2b1は、アダプタータンパク質SH2-Bをコードしており、活性化された受容体型チロシンキナーゼやサイトカイン受容体を、JAK/STAT、PI3K–AKT、MAPKなどの下流経路へと結び付ける細胞質シグナル伝達スキャフォールドとして機能します。SH2ドメインおよびタンパク質間相互作用モチーフを介して、SH2-Bはシグナルの強度と持続時間を調節し、細胞増殖、分化、代謝制御に影響を与えます。Sh2b1依存的なシグナル伝達は、エネルギー恒常性やインスリン／レプチン応答性ネットワークの文脈で広く研究されており、SH2B1機能の変化は代謝調節異常や神経内分泌制御に関わる表現型と関連付けられています。免疫系および神経系においても、SH2-Bは受容体介在性のシグナル伝達イベントに寄与し、炎症応答やシナプス／神経突起（ニューロイト）関連プロセスを形成します。

SH2-B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるSh2b1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Sh2b1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Sh2b1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、SH2-Bタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、SH2-Bシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Sh2b1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• SH2-Bの機能に不可欠なSh2b1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Sh2b1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• SH2-B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびSH2-B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Sh2b1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  SH2-B HDRプラスミド（m）および SH2-B HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSh2b1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSh2b1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。