SH-PTP2 Double Nickaseプラスミド (m): sc-422503-NIC

マウスのPtpn11は、SH2ドメインを2つ直列に備えた細胞質型のタンパク質チロシンホスファターゼであるSH-PTP2（SHP2）をコードしており、受容体型チロシンキナーゼ、サイトカイン受容体、免疫抑制受容体からのシグナルを中継する。SH-PTP2は、主要なドッキングタンパク質を脱リン酸化し、アダプター複合体を調節することでRAS–MAPK/ERKシグナル伝達を促進し、PI3K–AKTおよびJAK–STAT経路のダイナミクスにも影響を与え、増殖・分化・遊走といった応答を規定する。Ptpn11の活性は発生および造血のシグナル伝達プログラムに寄与しており、SH-PTP2依存性ネットワークの破綻は、異常な増殖因子シグナルや免疫細胞機能のモデルにおいて広く研究されている。リン酸化チロシンシグナルの結節点（ノード）となる調節因子として、Ptpn11はマウスの細胞や組織における経路間クロストーク、フィードバック制御、文脈依存的なシグナル伝達を解析する目的でしばしば用いられる。

SH-PTP2 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Ptpn11 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Ptpn11内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Ptpn11の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Ptpn11が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。