SGLT-1 Double Nickase Plasmid (h): sc-401588-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das SGLT-1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- SGLT-1 Double-Nickase-Plasmid (h) und SGLT-1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf SLC5A1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
SGLT-1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401588-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SGLT-1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401588-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SLC5A1 kodiert den menschlichen Natrium/Glukose-Kotransporter SGLT-1, einen Transporter der apikalen Membran, der Na⁺-Gradienten mit der Aufnahme von Glukose und Galaktose in intestinalen und renalen Epithelien koppelt. Durch den konzentrativen Hexosetransport trägt SGLT-1 zur epithelialen Nährstoffaufnahme, zur zellulären Osmoregulation und zur Verfügbarkeit metabolischer Substrate bei und ist dabei mit der Ionenhomöostase sowie energie-sensitiven Signalwegen verknüpft. Eine veränderte SLC5A1-Aktivität ist mit Störungen der intestinalen Kohlenhydratresorption assoziiert und kann die systemische Glukoseverwertung modulieren, was das Gen für Untersuchungen der Physiologie epithelialer Transportprozesse und metabolischer Dysregulation relevant macht. SGLT-1 wird außerdem als Marker und funktioneller Bestimmungsfaktor in Modellen der Barrierefunktion, Differenzierung und Transporterregulation genutzt.
SGLT-1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SLC5A1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SLC5A1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SLC5A1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SLC5A1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.