Plásmido CRISPR de Activación (h) SFRS2B: sc-401973-ACT

SRSF8 codifica el factor de empalme rico en serina/arginina SFRS2B, una proteína de unión a ARN que participa en el ensamblaje del espliceosoma y regula decisiones de empalme alternativo del pre-ARNm. Mediante el reconocimiento de potenciadores exónicos de empalme y la coordinación de la inclusión o el salto de exones, SFRS2B influye en la diversidad de isoformas de ARNm, la estabilidad de los transcritos y la composición del proteoma resultante. La actividad de los factores de empalme se interrelaciona con la elongación transcripcional, el procesamiento del ARNm y el metabolismo del ARN sensible al estrés, configurando programas de estado celular como la proliferación y la diferenciación. El empalme alternativo desregulado y la expresión alterada de reguladores de la familia SR son características recurrentes de la biología de las enfermedades humanas, lo que respalda la investigación de redes de isoformas dependientes de SRSF8 en contextos oncogénicos y neurobiológicos.

SFRS2B El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SRSF8 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SFRS2B El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SRSF8 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SRSF8, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SFRS2B. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SRSF8 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SFRS2B en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SFRS2B en células tumorales con expresión de SRSF8 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.