SETX Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402354

Panoramica

SETX (senataxina) codifica un’elicasi DNA/RNA che risolve gli R-loop e altre strutture secondarie degli acidi nucleici che si formano durante la trascrizione, coordinando così l’allungamento trascrizionale con il mantenimento del genoma. Agisce all’interfaccia tra la risposta al danno al DNA accoppiata alla trascrizione, il controllo dello stress replicativo e il processamento dell’RNA, contribuendo a limitare rotture a doppio filamento e ricombinazioni aberranti in loci attivamente trascritti. L’attività di SETX è collegata a vie che coinvolgono l’RNA polimerasi II, fattori di riparo del DNA e la sorveglianza dei complessi trascrizionali bloccati. La deregolazione o mutazione di SETX è associata a fenotipi neurodegenerativi e a sindromi di instabilità genomica, rendendolo un bersaglio rilevante per studi meccanicistici sul danno al DNA associato alla trascrizione e sulla vulnerabilità neuronale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SETX (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SETX in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SETX insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SETX a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SETX.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SETX per lo studio della segnalazione di SETX, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SETX critici per la funzione di SETX
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SETX per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SETX CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal SETX CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SETX. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SETX Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR SETX (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SETX per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SETX definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.