Set1B Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-431532

Descripción general

Setd1b codifica la metiltransferasa de lisina de histonas Set1B, un componente central de complejos tipo COMPASS que modifican la cromatina y catalizan la metilación de H3K4 en promotores activos y elementos reguladores. Mediante la modulación de los estados H3K4me1/2/3, Set1B ayuda a coordinar el inicio de la transcripción, la actividad de la ARN polimerasa II y el mantenimiento epigenético de los programas de identidad celular. La regulación de la cromatina dependiente de Setd1b se vincula con redes de expresión génica del desarrollo y neuronales, y la alteración de la función de SETD1B se asocia con fenotipos del neurodesarrollo y con una desregulación epigenética más amplia relevante para la biología de las enfermedades. En sistemas de ratón, Set1B constituye un objetivo abordable para desentrañar cómo la metilación de histonas asociada a promotores da forma a la transcripción sensible a señales y a los paisajes de cromatina a escala genómica.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Set1B (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Setd1b en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Setd1b junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Setd1b tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Set1B.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Setd1b para la investigación de la señalización de Set1B, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Setd1b críticos para la función de Set1B
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Setd1b para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Set1B CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Set1B CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Setd1b. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Set1B (m) y el plásmido HDR Set1B (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Setd1b para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Setd1b definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.