serum reponse factor /SRF Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400470-ACT

O SRF humano (serum response factor) é um fator de transcrição da família MADS-box que se liga a elementos de resposta ao soro para coordenar programas de expressão de genes de resposta imediata (immediate-early) em resposta a fatores de crescimento, mitógenos e estímulos mecânicos. Ele integra a sinalização por meio da dinâmica RhoA–actina via cofatores MRTF e das vias MAPK/ERK via fatores do complexo ternário, regulando a organização do citoesqueleto, adesão celular, migração e diferenciação miogênica. Redes transcricionais dependentes de SRF moldam a expressão gênica do músculo liso e cardíaco e processos mais amplos de remodelamento responsivo ao estresse. A atividade desregulada de SRF tem sido associada a sinalização proliferativa aberrante, motilidade alterada e remodelamento patológico de tecidos, tornando-o um ponto útil para estudos mecanísticos de circuitos de regulação gênica.

serum reponse factor /SRF O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SRF sem alterar a sequência de ADN subjacente.

serum reponse factor /SRF O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SRF em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SRF, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de serum reponse factor /SRF. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SRF nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de serum reponse factor /SRF no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via serum reponse factor /SRF em células tumorais com expressão de SRF silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.