Septin 8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422891

概要

Sept8は、GTP結合性の細胞骨格タンパク質であるセプチン8をコードします。セプチン8は、ヘテロオリゴマー性のセプチンフィラメントやリング状構造へと集合し、膜の足場形成を担うとともに、アクチン—微小管インターフェースの組織化に関与します。セプチン8は、細胞質分裂、細胞極性、小胞輸送に寄与し、特化した膜ドメインで拡散バリアを形成することでシグナル伝達の区画化にも関わります。神経細胞では、セプチン8を含むセプチン複合体が神経突起の形態形成やシナプス構築と関連しており、マウスモデルにおける発生および神経回路維持の研究を支えています。セプチンネットワーク動態の破綻は、がんや神経変性研究の文脈で観察される細胞分裂異常や細胞骨格リモデリングの変化と関連付けられており、Sept8は機構解明のための経路解析に有用な標的となります。

Septin 8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるSept8遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Sept8内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Sept8のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Septin 8タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Septin 8シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Sept8欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Septin 8の機能に不可欠なSept8エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Sept8ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Septin 8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびSeptin 8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Sept8遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Septin 8 HDRプラスミド（m）および Septin 8 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSept8ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSept8標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。