Septin 14 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406949

概要

SEPT14は、ヘテロオリゴマー性のフィラメントやさらに高次のリング構造を形成する、GTP結合性の細胞骨格タンパク質であるセプチンファミリーの一員であるセプチン14をコードしています。セプチン14は、アクチン‐微小管インターフェースの組織化、膜リモデリング、そして細胞質分裂・細胞極性・小胞輸送を支える拡散バリアの確立に寄与します。さらに、セプチン依存的な足場形成は、細胞皮質におけるシグナル伝達やタンパク質の区画化も調整し、細胞骨格ダイナミクスを細胞周期の進行と結び付けます。セプチンの発現異常やフィラメント構造の破綻は、疾患に関連する状況において増殖や細胞構築の変化と関連づけられており、細胞骨格機能不全の機構解明に向けてSEPT14を検討する意義が示唆されます。

Septin 14 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるSEPT14遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、SEPT14内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、SEPT14のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Septin 14タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Septin 14シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、SEPT14欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Septin 14の機能に不可欠なSEPT14エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、SEPT14ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Septin 14 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびSeptin 14 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、SEPT14遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Septin 14 HDRプラスミド（h）および Septin 14 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSEPT14ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSEPT14標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。