SEMA3G CRISPR Activationプラスミド (m): sc-432329-ACT

Sema3gは、分泌型のクラス3セマフォリンであるセマフォリン3G（SEMA3G）をコードしており、細胞移動、接着、組織パターニングに影響する細胞間のガイダンス（誘導）シグナルの調整に寄与します。SEMA3Gは主にニューロピリンおよびプレキシン受容体複合体を介してシグナル伝達を行い、細胞骨格ダイナミクスやRhoファミリーGTPaseシグナル伝達などの下流経路を調節することで、方向性のある運動性や形態形成に影響を与えます。マウスの系では、セマフォリンシグナルの変化が神経・血管パターニングの異常、血管新生リモデリング、炎症細胞のトラフィッキングの破綻と関連することが示されており、Sema3gは発生や疾患に伴う微小環境の変化を研究するうえで重要です。これらの経路的背景は、細胞外のガイダンスリガンドが内皮細胞の挙動、神経回路の連結性、間質（ストローマ）の組織化をどのように再編するかを検討する研究を後押しします。

SEMA3G CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Sema3gの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SEMA3G CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Sema3g 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSema3g転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SEMA3Gの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSema3g遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSEMA3G依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSema3g発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSEMA3G経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。