Plasmide CRISPR d'Activation (m) SEMA3G: sc-432329-ACT

Sema3g code la sémaphorine 3G (SEMA3G), une sémaphorine sécrétée de classe 3 qui contribue à coordonner des signaux de guidage intercellulaire influençant la migration cellulaire, l’adhérence et l’organisation des tissus. SEMA3G signale principalement via des complexes de récepteurs neuropilines/plexines afin de moduler la dynamique du cytosquelette et des voies en aval telles que la signalisation des GTPases de la famille Rho, influençant ainsi la motilité directionnelle et la morphogenèse. Dans les modèles murins, des altérations de la signalisation des sémaphorines ont été associées à une organisation neurovasculaire perturbée, au remodelage angiogénique et au trafic des cellules inflammatoires, ce qui rend Sema3g pertinent pour l’étude du développement et des modifications du microenvironnement liées aux maladies. Le contexte de cette voie permet d’examiner comment des ligands de guidage extracellulaires remodèlent le comportement endothélial, la connectivité neuronale et l’organisation stromale.

SEMA3G Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Sema3g sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SEMA3G Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Sema3g dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Sema3g, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SEMA3G. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Sema3g natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SEMA3G au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SEMA3G dans les cellules tumorales présentant une expression de Sema3g silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.