Selenoprotein P CRISPR Activation Plasmid (h): sc-417457-ACT

SELENOP kodiert Selenoprotein P, ein sezerniertes Glykoprotein, das als wichtiger Selenium-Transportfaktor im Plasma wirkt und die systemische Verteilung von Selenium in periphere Gewebe unterstützt. Durch die Bereitstellung von Selenium für die Biosynthese von Selenoenzymen trägt SELENOP zur zellulären Redox-Homöostase, zur antioxidativen Abwehr und zum Schutz vor oxidativem und entzündlichem Stress bei, was insbesondere für die Leberfunktion und die metabolische Regulation relevant ist. Eine veränderte SELENOP-Expression wurde mit fehlregulierten oxidativen Stressantworten und Phänotypen metabolischer Erkrankungen in Verbindung gebracht und wird häufig im Zusammenhang mit Insulinsignalgebung, Lipidstoffwechsel und Entzündungssignalwegen untersucht. Als zirkulierender, hepatokinähnlicher Faktor dient Selenoprotein P außerdem als molekularer Readout für hepatische Sekretionsprogramme und nährstoffabhängige transkriptionelle Kontrolle.

Selenoprotein P Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SELENOP-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Selenoprotein P Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SELENOP-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SELENOP-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Selenoprotein P-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SELENOP-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Selenoprotein P-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Selenoprotein P-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SELENOP-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.