Seipin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406865

Visão geral

BSCL2 codifica a seipina, uma proteína de membrana do retículo endoplasmático que organiza a biogênese de gotículas lipídicas e regula o armazenamento de triacilgliceróis ao coordenar os contactos entre o RE e as gotículas lipídicas. A seipina favorece a diferenciação de adipócitos e a homeostase lipídica por meio de efeitos na remodelação de fosfolípidos, no acondicionamento de lípidos neutros e na proteostase do RE, ligando o metabolismo lipídico à morfologia dos organelos. A disrupção de BSCL2 altera o tamanho e a distribuição das gotículas lipídicas e pode desencadear respostas de stress do RE, tornando-o um nó central em estudos do equilíbrio energético celular. A variação genética em BSCL2 está associada à lipodistrofia generalizada congénita e a fenótipos neurodegenerativos do espectro das seipinopatias, conectando a disfunção do tecido adiposo e a vulnerabilidade neuronal a alterações no processamento de lípidos.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Seipin (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene BSCL2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do BSCL2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do BSCL2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Seipin.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de BSCL2 para a investigação da sinalização de Seipin, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) BSCL2 críticos para a função Seipin
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos BSCL2 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Seipin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Seipin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus BSCL2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Seipin Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Seipin (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia BSCL2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo BSCL2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.