secretin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422831

概要

マウスのSctは、ペプチドホルモン／神経ペプチドであるセクレチンをコードしており、主にセクレチン受容体（SCTR）を介してシグナルを伝達する。SCTRはアデニル酸シクラーゼを活性化し、cAMP/PKA依存的な転写プログラムを駆動するクラスB GPCRである。セクレチンは、膵臓における重炭酸イオンに富む膵液分泌、胆道機能、消化管運動の調節に寄与し、さらに神経細胞の興奮性や視床下部—下垂体系のシグナル伝達も調節する。cAMPに連動した経路および下流のイオン輸送過程を通じて、Sctは上皮の体液恒常性と神経内分泌コミュニケーションに影響を与える。セクレチンシグナルの変化は、膵・胆道機能障害、代謝や食欲調節、ならびに神経発達および消化器研究に関連する中枢神経系表現型の文脈で研究されてきた。

secretin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるSct遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Sct内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Sctのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、secretinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、secretinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Sct欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• secretinの機能に不可欠なSctエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Sctゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• secretin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびsecretin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Sct遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  secretin HDRプラスミド（m）および secretin HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSctホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSct標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。