SEC24A CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-429522

概要

Sec24aは、COPIIコートの中核構成要素であるSEC24Aをコードしており、小胞体からゴルジ体への順行性輸送において、カーゴの選別と輸送の駆動を担う。SEC24AはSEC23と複合体を形成し、カーゴアダプターと相互作用することで、分泌輸送、小胞体（ER）のプロテオスタシス、および膜恒常性の制御に寄与し、これらは脂質の取り扱いや細胞表面受容体の構成に影響を及ぼす。COPII依存的な輸送（エクスポート）が破綻すると、ERストレス応答が誘導され、細胞外マトリックスやシグナル分子の送達が変化し得ることから、SEC24Aの機能は代謝や組織恒常性を制御する経路と関連づけられる。マウスでは、選択的なカーゴ梱包が全身の脂質・リポタンパク質生物学や、より広範な分泌経路の表現型にどのように影響するかを調べる目的でSec24aが利用されてきた。

SEC24A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるSec24a遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Sec24a内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Sec24aのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、SEC24Aタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、SEC24Aシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Sec24a欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• SEC24Aの機能に不可欠なSec24aエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Sec24aゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• SEC24A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびSEC24A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Sec24a遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  SEC24A HDRプラスミド（m）および SEC24A HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSec24aホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSec24a標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。