SCML2 Double Nickase Plasmid (h): sc-405003-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das SCML2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- SCML2 Double-Nickase-Plasmid (h) und SCML2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf SCML2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: SCML2: sc-271097
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
SCML2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-405003-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SCML2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-405003-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SCML2 (sex comb on midleg-like 2) ist ein Polycomb-Gruppenprotein, das zur epigenetischen Genregulation beiträgt, indem es an Chromatin bindet und Programme der transkriptionellen Repression koordiniert. In menschlichen Zellen ist SCML2 in der männlichen Keimbahn angereichert und an der Etablierung von Chromatinzuständen beteiligt, die die Spermatogenese unterstützen, einschließlich der Regulation der meiotischen Genexpression und der chromosomenbezogenen Chromatindynamik der Geschlechtschromosomen. Durch die Modulation Polycomb-assoziierter Signalwege und der Landschaft von Histonmodifikationen beeinflusst SCML2 Entwicklungs-Gennetzwerke sowie Entscheidungen zur zellulären Identität. Eine veränderte SCML2-Funktion oder -Expression wurde mit Defekten der Keimzellentwicklung in Verbindung gebracht und im Kontext der fehlregulierten epigenetischen Kontrolle untersucht, wie sie bei malignitätsassoziierten Transkriptionsprogrammen beobachtet wird.
SCML2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SCML2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SCML2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SCML2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SCML2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.