SCLIP CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406430

概要

STMN3（SCLIP）は、神経細胞で高発現するスタスミンファミリーのタンパク質で、チューブリンに結合して微小管動態を調節し、軸索の伸長、神経突起の分岐、シナプス構造の形成を支えます。微小管の重合と安定性を制御することで、SCLIPは細胞骨格の再構築に関わる過程に寄与し、細胞内輸送や神経細胞の極性に影響を与えます。STMN3の発現や機能の変化は神経回路の連結異常と関連づけられており、微小管の恒常性が破綻する神経発達および神経変性のメカニズムの文脈で研究されています。細胞骨格調節因子としてのSCLIPは、微小管動態を神経細胞の分化、可塑性、ストレス応答へと結びつける経路を解明するうえで重要です。

SCLIP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるSTMN3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、STMN3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、STMN3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、SCLIPタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、SCLIPシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、STMN3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• SCLIPの機能に不可欠なSTMN3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、STMN3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• SCLIP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびSCLIP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、STMN3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  SCLIP HDRプラスミド（h）および SCLIP HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSTMN3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSTMN3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。