Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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SCD1 Double Nickase Plasmid (m): sc-422809-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das SCD1 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- SCD1 Double-Nickase-Plasmid (m) und SCD1 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Scd1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: SCD1: sc-515844
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
SCD1 Double Nickase Plasmid (m) | sc-422809-NIC | 20 µg | $410.00 |
Das murine Scd1-Gen kodiert die Stearoyl-CoA-Desaturase 1 (SCD1), ein im endoplasmatischen Retikulum lokalisiertes Enzym, das in gesättigte Fettsäureacyl-CoAs eine cis-Doppelbindung einführt und dadurch einfach ungesättigte Fettsäuren wie Palmitoleat und Oleat erzeugt. Durch die Kontrolle des Verhältnisses von gesättigten zu einfach ungesättigten Lipiden reguliert SCD1 die de-novo-Lipogenese, die Phospholipidzusammensetzung der Membranen, die Synthese von Triglyceriden und Cholesterinestern sowie die Biogenese von Lipidtröpfchen, mit nachgeschalteten Effekten auf ER-Stressantworten und metabolische Signalwege. Die Scd1-Aktivität greift in nährstoffsensorische Transkriptionsprogramme ein, darunter SREBP1- und PPAR-Signalwege, und beeinflusst so zelluläre Energiespeicherung und Redox-Homöostase. Eine veränderte SCD1-Expression oder -Aktivität wurde mit metabolischen Phänotypen in Verbindung gebracht, darunter hepatische Steatose und adipositasassoziierte Dysregulation, und wird häufig im Kontext von Lipidumbau in proliferativen und entzündlichen Zuständen untersucht.
SCD1 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Scd1-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Scd1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Scd1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Scd1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.