Plasmide Double Nickase (h) SCD: sc-401516-NIC

La stéaroyl-CoA désaturase (SCD) est une enzyme clé du réticulum endoplasmique qui introduit une double liaison cis dans les acyl-CoA d’acides gras saturés, produisant des acides gras mono-insaturés qui soutiennent la fluidité membranaire, la biogenèse des gouttelettes lipidiques et l’acylation des protéines. En contrôlant l’équilibre entre lipides saturés et mono-insaturés, la SCD influence la lipogenèse de novo, le remodelage des phospholipides et les réseaux de signalisation liés au stress du RE et au stress oxydatif. L’activité de la SCD s’intègre aux programmes métaboliques régulés par SREBP et PPAR, qui coordonnent la synthèse et le stockage des acides gras. Une expression ou une activité dérégulée de la SCD est associée à des phénotypes métaboliques impliquant la sensibilité à l’insuline et l’accumulation de lipides hépatiques, et elle est fréquemment étudiée dans des contextes de croissance dépendante des lipides et d’adaptation au stress.

SCD Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus SCD dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de SCD. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de SCD. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de SCD.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.