Plásmido CRISPR de Activación (h) SCCA1: sc-403601-ACT

SERPINB3 codifica el antígeno 1 del carcinoma de células escamosas (SCCA1), un inhibidor intracelular de serinproteasas de la familia de las serpinas que modula la proteostasis impulsada por proteasas y las respuestas al estrés epitelial. SCCA1 puede restringir la actividad de proteasas tipo catepsina y tipo quimasa, lo que influye en la integridad lisosomal, el procesamiento de antígenos y los programas de señalización apoptótica o inflamatoria en epitelios diferenciados. La expresión desregulada de SERPINB3 se ha asociado con la remodelación epitelial y con fenotipos relacionados con el sistema inmunitario observados en contextos de neoplasias escamosas, lo que lo convierte en un marcador útil y en un nodo funcional para estudiar la inflamación asociada a tumores y las vías de supervivencia celular. En modelos celulares, la alteración de SERPINB3 suele evaluarse junto con vías que regulan el estrés oxidativo, la señalización por citocinas y la diferenciación epitelial.

SCCA1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SERPINB3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SCCA1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SERPINB3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SERPINB3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SCCA1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SERPINB3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SCCA1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SCCA1 en células tumorales con expresión de SERPINB3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.