SARP3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-424898

概要

Sfrp5は、分泌型フリズルド関連タンパク質であるSARP3をコードしており、細胞外におけるWntリガンドの利用可能性を調節し、Wnt/βカテニン経路および非カノニカルWntシグナル伝達を精密に制御します。細胞表面での受容体―リガンド相互作用を形成することで、SARP3は発生過程および成体の恒常性維持における細胞運命の決定、増殖、組織リモデリングに影響を与えます。マウスモデルでは、Sfrp5活性の変化が脂肪組織の生物学的制御異常、炎症、代謝表現型の乱れと関連づけられており、インスリン感受性やエネルギーバランスの研究において重要な分子です。また、分泌型であることから、SARP3は間質―免疫―上皮の微小環境におけるパラクリンシグナル伝達の重要な結節点として位置づけられます。

SARP3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるSfrp5遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Sfrp5内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Sfrp5のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、SARP3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、SARP3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Sfrp5欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• SARP3の機能に不可欠なSfrp5エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Sfrp5ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• SARP3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびSARP3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Sfrp5遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  SARP3 HDRプラスミド（m）および SARP3 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSfrp5ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSfrp5標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。