SAP 97 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400865

概要

DLG1は、シナプス関連タンパク質97（SAP97）をコードする。SAP97は膜関連グアニル酸キナーゼ（MAGUK）ファミリーに属する足場（スキャフォールド）タンパク質であり、細胞膜上で多タンパク質複合体の形成・配置を担う。SAP97は、AMPA型／NMDA型グルタミン酸受容体などを含むイオンチャネルや受容体の輸送（トラフィッキング）および安定化を調節し、PDZ・SH3・GK各ドメイン間の相互作用を介してそれらをアクチン細胞骨格へ連結する。さらに、細胞間接着部位と極性シグナル伝達を統合的に制御することで、DLG1はシナプス可塑性、上皮の構造的完全性、免疫シナプスの組織化に影響を及ぼす。DLG1に関連する足場ネットワークの制御異常は、神経発達・神経精神疾患関連の表現型や、がんにおける接着・遊走・シグナル恒常性の変化との関連で研究されている。

SAP 97 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるDLG1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、DLG1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、DLG1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、SAP 97タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、SAP 97シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、DLG1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• SAP 97の機能に不可欠なDLG1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、DLG1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• SAP 97 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびSAP 97 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、DLG1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  SAP 97 HDRプラスミド（h）および SAP 97 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはDLG1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のDLG1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。