Plasmide Double Nickase (h) SAP 49: sc-407057-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) SAP 49 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide SAP 49 Double Nickase (h) et le plasmide SAP 49 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant SF3B4. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: SAP 49 Antibody (G-12): sc-365570
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) SAP 49 | sc-407057-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) SAP 49 | sc-407057-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SF3B4 code pour SAP 49, un composant central de la sous-complexe SF3b au sein de la petite ribonucléoprotéine nucléaire U2, qui contribue à la reconnaissance des séquences du point de branchement lors de l’épissage des pré-ARNm. En soutenant l’assemblage du spliceosome et la sélection des sites d’épissage, SAP 49 participe à l’intégrité du transcriptome et à la régulation en aval du traitement de l’ARN, des programmes du cycle cellulaire et des réponses au stress. La perturbation de l’épissage dépendant de SF3B4 est associée à une expression d’isoformes altérée et à de larges modifications des réseaux de régulation génique observées dans de multiples contextes pathologiques, notamment les cancers et les troubles du développement. En tant que facteur du spliceosome, SAP 49 est fréquemment étudiée dans les mécanismes de fidélité de l’épissage, le contrôle de l’épissage alternatif et les relations génotype–isoforme.
SAP 49 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus SF3B4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de SF3B4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de SF3B4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de SF3B4.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.