Plasmide Double Nickase (m) SAMC: sc-426639-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) SAMC correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide SAMC Double Nickase (m) et le plasmide SAMC Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Slc25a26. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) SAMC | sc-426639-NIC | 20 µg | $410.00 |
Slc25a26 code SAMC (transporteur de la S-adénosylméthionine), un transporteur de la membrane interne mitochondriale qui importe la S-adénosylméthionine dans la matrice afin de soutenir les réactions de méthylation intramitochondriales. En fournissant un donneur de groupements méthyle aux méthyltransférases, SAMC relie le métabolisme à un carbone au contrôle de l’expression des gènes mitochondriaux, à la modification des ARNt/ARNr et au maintien de la capacité de phosphorylation oxydative. Une perturbation du transport mitochondrial de la SAM peut déplacer l’équilibre rédox, modifier l’assemblage de la chaîne respiratoire et perturber l’adaptation métabolique dans les tissus à forte demande énergétique. Ces processus sont pertinents pour l’étude de la dysfonction mitochondriale, des phénotypes neuromusculaires et, plus largement, des réponses au stress métabolique dans des modèles murins.
SAMC Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Slc25a26 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Slc25a26. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Slc25a26. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Slc25a26.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.