SA-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401222

概要

STAG2は、姉妹染色分体の接着および高次のゲノム構造形成を担うコヒーシン複合体の中核構成要素である、ヒトのコヒーシンサブユニットSA-2をコードしています。SA-2は、有糸分裂および減数分裂における正確な染色体分配を支え、DNA二本鎖切断の修復に寄与するとともに、転写プログラムを形作る長距離エンハンサー–プロモーター相互作用の制御にも関与します。これらの役割を通じて、STAG2は細胞周期制御、複製ストレス応答、クロマチン構造制御の各経路と交差します。STAG2の破綻はがんゲノム解析でしばしば観察され、染色体不安定性や遺伝子制御の変化と関連することから、ゲノム維持研究において広く研究されている遺伝子座です。

SA-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるSTAG2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、STAG2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、STAG2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、SA-2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、SA-2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、STAG2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• SA-2の機能に不可欠なSTAG2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、STAG2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• SA-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびSA-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、STAG2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  SA-2 HDRプラスミド（h）および SA-2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSTAG2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSTAG2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。