S-100 β chain CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422787

概要

S100bは、S-100β鎖をコードする遺伝子であり、アストロサイトやその他のグリア細胞集団に豊富に発現する、Ca2+結合性のEFハンドタンパク質です。S-100βは細胞内ではシグナル調節因子として、細胞外では傍分泌因子として機能します。カルシウム依存的に細胞骨格や酵素などの標的分子と相互作用することで、神経突起の伸長、細胞周期の進行、ストレス応答に影響を与え、さらにRAGE関連経路などの受容体介在性シグナル伝達を介してMAPKおよびNF-κBプログラムへと収束する反応を引き起こし得ます。中枢神経系においてS100bはグリアマーカーとして広く用いられ、神経炎症、血液脳関門の制御、酸化ストレスや代謝ストレスへの応答とも関連しています。S100b発現の変化は、さまざまな神経疾患・神経変性疾患モデルや損傷モデルで報告されており、グリア—ニューロン間コミュニケーションや炎症性シグナル伝達ネットワークの解明に有用であることが示されています。

S-100 β chain CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるS100b遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、S100b内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、S100bのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、S-100 β chainタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、S-100 β chainシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、S100b欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• S-100 β chainの機能に不可欠なS100bエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、S100bゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• S-100 β chain CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびS-100 β chain CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、S100b遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  S-100 β chain HDRプラスミド（m）および S-100 β chain HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはS100bホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のS100b標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。