S-100 β chain Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400707

Descripción general

S100B codifica la cadena beta de S-100, una proteína fijadora de calcio de la familia S100 que modula la señalización intracelular de Ca2+ y las respuestas extracelulares mediadas por receptores de manera dependiente del contexto celular. Participa en la regulación de la dinámica del citoesqueleto, la progresión del ciclo celular, las respuestas al estrés oxidativo y la señalización inflamatoria, incluidas interacciones que influyen en procesos vinculados a MAPK/ERK y NF-κB. La S-100β se ha estudiado ampliamente en la biología de los astrocitos y la neuroinflamación, y la alteración de su expresión se ha asociado con lesión neurológica y trastornos neurodegenerativos, así como con la señalización del microambiente tumoral en ciertos cánceres. Estas funciones hacen de S100B un nodo útil para analizar estados de activación glial, señalización de estrés y vías de comunicación célula–célula.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO S-100 β chain (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen S100B en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del S100B junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de S100B tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína S-100 β chain.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en S100B para la investigación de la señalización de S-100 β chain, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de S100B críticos para la función de S-100 β chain
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de S100B para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido S-100 β chain CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido S-100 β chain CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus S100B. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR S-100 β chain (h) y el plásmido HDR S-100 β chain (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología S100B para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana S100B definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.