Plasmide CRISPR d'Activation (h) Rsk-1: sc-401073-ACT

RPS6KA1 code la kinase ribosomique S6 1 (Rsk-1), une sérine/thréonine kinase qui agit en aval d’ERK1/2 dans la cascade de signalisation MAPK. Rsk-1 phosphoryle des substrats nucléaires et cytosoliques afin de relier les signaux mitogènes et de stress à des programmes transcriptionnels qui contrôlent la progression du cycle cellulaire, la différenciation, la survie et la synthèse protéique, notamment via la régulation de CREB et d’autres régulateurs transcriptionnels. En intégrant les sorties de la voie MAPK au contrôle de la traduction et à une signalisation associée à la chromatine, Rsk-1 influence la croissance cellulaire et les réponses adaptatives. Une activité RPS6KA1/RSK dérégulée a été étudiée dans des contextes de prolifération aberrante, d’apoptose altérée et de remodelage des voies de signalisation en oncologie et dans d’autres maladies liées à des dérèglements de la signalisation.

Rsk-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de RPS6KA1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Rsk-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus RPS6KA1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription RPS6KA1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Rsk-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus RPS6KA1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Rsk-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Rsk-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de RPS6KA1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.