Rsk-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401073-ACT

RPS6KA1 codifica a quinase ribossomal S6 1 (Rsk-1), uma quinase de serina/treonina que atua a jusante de ERK1/2 na cascata de sinalização MAPK. A Rsk-1 fosforila substratos nucleares e citosólicos para conectar sinais mitogênicos e de estresse a programas transcricionais que controlam a progressão do ciclo celular, a diferenciação, a sobrevivência e a síntese proteica, incluindo a regulação de CREB e de outros reguladores transcricionais. Ao integrar as saídas da MAPK com o controle translacional e a sinalização associada à cromatina, a Rsk-1 influencia o crescimento celular e respostas adaptativas. A atividade desregulada de RPS6KA1/RSK tem sido estudada em contextos de proliferação aberrante, apoptose alterada e reprogramação de vias em oncologia e outras doenças impulsionadas por sinalização.

Rsk-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RPS6KA1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Rsk-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RPS6KA1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RPS6KA1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Rsk-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RPS6KA1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Rsk-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Rsk-1 em células tumorais com expressão de RPS6KA1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.