Rrn3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-403709

概要

RRN3 は、RNAポリメラーゼI（Pol I）に結合する転写因子 Rrn3 をコードしており、Pol I をリボソームDNA（rDNA）へリクルートして前駆体rRNA（pre-rRNA）の合成を支えることで、増殖シグナルとリボソーム生合成を結び付けています。Rrn3 の活性は、栄養やストレスに応答するシグナル伝達によって調節され、mTOR 依存的な Pol I 転写開始の制御などが含まれます。また、rRNA 産生量を制御することで、核小体機能やプロテオスタシスにも寄与します。rDNA 転写は増殖や細胞のストレス適応と密接に結び付いているため、RRN3–Pol I のダイナミクスの変化は、増殖制御の破綻、ゲノム不安定性、核小体ストレス表現型といった文脈で研究されています。したがって RRN3 は、リボソーム生合成が細胞周期制御や代謝リプログラミングとどのように連携するかを検討するうえで重要な標的です。

Rrn3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるRRN3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、RRN3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、RRN3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Rrn3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Rrn3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、RRN3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Rrn3の機能に不可欠なRRN3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、RRN3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Rrn3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびRrn3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、RRN3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Rrn3 HDRプラスミド（h）および Rrn3 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはRRN3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のRRN3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。