ROS-GC1 Double Nickase Plasmid (h): sc-404483-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ROS-GC1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ROS-GC1 Double-Nickase-Plasmid (h) und ROS-GC1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GUCY2D abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ROS-GC1: sc-376217
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ROS-GC1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-404483-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ROS-GC1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404483-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane Gen **GUCY2D** kodiert die Guanylatzyklase 1 des äußeren Netzhautsegments (**ROS-GC1**), ein membranassoziiertes Enzym, das GTP zu cGMP umsetzt und so die zyklische Nukleotid-Signalübertragung in Photorezeptorzellen aufrechterhält. ROS-GC1 wirkt nachgeschaltet der Phototransduktion und integriert Ca²⁺-abhängige Rückkopplung über Guanylatzyklase-aktivierende Proteine, um cGMP-Spiegel wiederherzustellen und die Aktivität cGMP-gesteuerter Kanäle zu regulieren. Dieser Signalweg unterstützt die Homöostase des äußeren Segments und die synaptische Signalübertragung, indem lichtgetriebene Veränderungen des intrazellulären Ca²⁺ mit dem Umsatz zyklischer Nukleotide gekoppelt werden. Genetische Veränderungen in **GUCY2D** sind stark mit Phänotypen erblicher Netzhautdegeneration verbunden, was das Gen zu einem zentralen Ansatzpunkt für die Untersuchung des cGMP-Stoffwechsels, der Genauigkeit sensorischer Signalübertragung und von Mechanismen des Photorezeptor-Überlebens macht.
ROS-GC1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GUCY2D-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GUCY2D abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GUCY2D-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GUCY2D-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.