Rock-1 Double Nickase Plasmid (h): sc-400367-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Rock-1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Rock-1 Double-Nickase-Plasmid (h) und Rock-1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ROCK1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Rock-1: sc-17794
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Rock-1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400367-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Rock-1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400367-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane Gen **ROCK1** kodiert die Rho-assoziierte Proteinkinase 1 (Rock-1), eine Serin/Threonin-Kinase, die als wichtiger Effektor von RhoA wirkt und die Aktin-Myosin-Kontraktilität, die Bildung von Stressfasern, die Dynamik fokaler Adhäsionen sowie die Zellpolarität reguliert. Rock-1 phosphoryliert Substrate wie MYPT1 und LIMK und verknüpft damit die Rho-GTPase-Signalgebung mit der Phosphorylierung der Myosin-Leichtkette, der Regulation von Cofilin und dem Umbau des Zytoskeletts während Migration, Zytokinese und Apoptose. Über diese Prozesse beeinflusst ROCK1 die epithelial-mesenchymale Plastizität, die Barrierefunktion und Mechanotransduktionswege einschließlich YAP/TAZ-abhängiger Programme. Eine Fehlregulation der ROCK1-Aktivität wird mit pathologischem Gewebeumbau, Fibrose, vaskulärer Dysfunktion sowie Tumorzellinvasion und Metastasierung in Verbindung gebracht, wodurch ROCK1 ein breit untersuchter Knotenpunkt in der Forschung zum Zytoskelett sowie zur Rho/ROCK-Signalachse ist.
Rock-1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ROCK1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ROCK1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ROCK1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ROCK1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.