robo2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-435289

概要

ROBO2（ラウンドアバウト誘導受容体2）は、SLIT/ROBOシグナル伝達系に属する膜貫通型受容体をコードしており、細胞骨格の再編成と細胞の方向性移動を介して、軸索誘導、神経細胞の移動、ならびに組織形態形成を制御します。マウスでは、robo2の機能は神経系および複数の上皮構造の発生と関連し、細胞極性、接着、反発性の誘導シグナルを制御する経路に下流で影響を及ぼします。ROBO2活性の変化は先天性の発生異常や細胞移動の制御破綻に関連づけられており、神経発生や器官形成の機構研究において重要です。そのシグナルは、成長円錐のダイナミクスや協調的な細胞配置を形作るRhoファミリーGTPase依存的プロセスと相互に連関しています。

robo2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるRobo2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Robo2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Robo2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、robo2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、robo2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Robo2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• robo2の機能に不可欠なRobo2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Robo2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• robo2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびrobo2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Robo2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  robo2 HDRプラスミド（m）および robo2 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはRobo2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のRobo2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。