RNF8 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401909-ACT

RNF8はE3ユビキチンリガーゼをコードしており、DNA損傷応答において初期のシグナル増幅因子として機能する。DNA二本鎖切断部位でのユビキチン化を触媒し、修復因子のリクルートを協調的に制御する。MDC1との相互作用や、損傷クロマチンへのリン酸化依存的なドッキングを介して、RNF8は53BP1やBRCA1など下流メディエーターのユビキチン依存的な集積を促進し、非相同末端結合（NHEJ）と相同組換え（HR）のどちらの経路を選択するかに影響を与える。さらにRNF8の活性は、ゲノム監視を細胞周期チェックポイント制御およびクロマチンリモデリングと結び付け、複製ストレス下でのゲノム安定性の維持に寄与する。RNF8シグナルの制御異常は、DNA修復能の変化やゲノム不安定性の表現型と関連づけられており、がん生物学や遺伝毒性ストレス因子に対する感受性に関与するとされる。

RNF8 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性RNF8の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

RNF8 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における RNF8 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はRNF8転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性RNF8の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のRNF8遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRNF8依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびRNF8発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRNF8経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。