RNF4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422689

Visão geral

Rnf4 codifica a RNF4, uma ligase de ubiquitina do tipo RING direcionada a SUMO (STUbL) que reconhece proteínas poliSUMOiladas e catalisa a sua ubiquitinação para direcionar a degradação ou a remodelação de complexos proteicos. Em células de camundongo, a RNF4 ajuda a regular as respostas a danos no DNA ao promover a remoção de fatores de reparo e de sinalização modificados por SUMO, conectando a SUMOilação à proteostase dependente de ubiquitina. Essa atividade contribui para a estabilidade do genoma, para o manejo do estresse de replicação e para o controle transcricional por meio da regulação dinâmica de complexos proteicos nucleares. A desregulação de vias mediadas por STUbL é amplamente relevante para transformação celular e para fenótipos neurodegenerativos associados a comprometimento do controle de qualidade proteica e a defeitos no reparo de DNA.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO RNF4 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Rnf4 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Rnf4, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Rnf4 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína RNF4.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Rnf4 para a investigação da sinalização de RNF4, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Rnf4 críticos para a função RNF4
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Rnf4 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo RNF4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo RNF4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Rnf4. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo RNF4 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR RNF4 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Rnf4 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Rnf4 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.